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登革熱病毒間接法IgG抗體檢測試劑盒

Panbio Dengue IgG Indirect ELISA 

產(chǎn)品目錄號01PE30

預期用途

Panbio Dengue IgG Indirect ELISA用于定性檢測登革熱病原血清型（1、2、3和4）血清中的IgG抗體，輔助臨床實(shí)驗室診斷出現臨床癥狀或既往感染登革熱病毒的患者。

概述

蟲(chóng)媒病毒中的登革熱屬通過(guò)蚊子傳播，主要是埃及伊蚊和白紋伊蚊。 登革熱病毒感染，與傷寒病有關(guān)，其特征是突然發(fā)熱、劇烈頭痛、肌痛、關(guān)節痛和皮疹。 登革熱感染的嚴重并發(fā)癥包括登革出血熱和登革休克綜合征。此類(lèi)并發(fā)癥的發(fā)病率增加與繼發(fā)性感染不同登革熱血清型有關(guān)。

通過(guò)ELISA對四種登革熱血清型的IgG類(lèi)特異性抗體進(jìn)行檢測，是一種診斷既往感染登革熱病毒的患者的重要方法。 配對血清中IgG, 水平不斷升高是活動(dòng)性登革熱感染的表現。傳統上，血凝抑制試驗（HAI）滴度被用于劃分原發(fā)性或繼發(fā)性感染。當前的界定方法是采用及時(shí)分離至少7天的配對血清標本檢測，急性標本的HAI滴度≥ 1:2560被認為患者感染了繼發(fā)性黃病毒¹。

檢測原理

血清中存在的登革熱病毒抗體，與微孔測試條上聚苯乙烯表面附著(zhù)的登革熱抗原結合物相結合。 洗去剩余的血清并添加過(guò)氧化物酶標記的抗人IgG抗體。清洗微孔，再添加無(wú)色的底物系統 - 四甲基聯(lián)苯胺/過(guò)氧化氫（TMB顯色液）。底物被酶水解后，顯色液變藍。用酸終止反應后，TMB變黃。顯色表示測試樣本中存在登革熱IgG抗體。

提供的材料

• 登革熱抗原（血清型1、2、3和4）包被微孔板-（12x8孔）。即用型。未使用的微孔應該立即重新密封并儲存于干燥環(huán)境中。有效期內儲存于2-8℃可保持穩定。
• 清洗緩沖液（20倍） - 1瓶，60mL 20倍濃縮磷酸鹽緩沖鹽水（pH 7.2 – 7.6），含吐溫 20和防腐劑（0.1% Proclin™）。低溫可能結晶。若去除結晶，可在37℃孵育液體至澄清?；旌暇鶆?。用19體積的蒸餾水稀釋1體積的清洗緩沖液。稀釋后的緩沖液可在2-25℃儲存一周。
• 樣本稀釋劑 – 2瓶， 50 mL（粉色）。即用型。Tris緩沖生理鹽水（pH 7.2 – 7.6），含防腐劑（0.1% Proclin™）和添加劑。有效期內儲存于2-8℃可保持穩定。
• HRP標記抗人IgG – 1瓶，15mL（綠色）。即用型。辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標記山羊抗人IgG，含防腐劑（0.1% Proclin™）和蛋白穩定劑。有效期內儲存于2-8℃可保持穩定。
• TMB顯色液（TMB） - 1瓶，15mL。即用型。3,3’,5,5'-四甲基聯(lián)苯胺和過(guò)氧化氫的混合物，存放于枸櫞酸鹽緩沖液中（pH 3.5 – 3.8）。有效期內儲存于2-8℃可保持穩定。
• 陽(yáng)性質(zhì)控品 – 1瓶，紅色瓶蓋，200μL人血清（含0.1%疊氮HUA鈉和0.005%硫酸慶大霉素）。有效期內儲存于2-8℃可保持穩定。
•  校準品 – 1瓶，黃色瓶蓋，850μL人血清（含0.1%疊氮HUA鈉和0.005%硫酸慶大霉素）。有效期內儲存于2-8℃可保持穩定。
• 陰性質(zhì)控品 – 1瓶，綠色瓶蓋，200μL人血清（含0.1%疊氮HUA鈉和0.005%硫酸慶大霉素）。有效期內儲存于2-8℃可保持穩定。
• 終止液 – 1瓶，紅色瓶蓋，15mL。即用型。1M磷酸。有效期內儲存于2-25℃可保持穩定。

Proclin™ 300是Rohm 和Haas公司的注冊商標。

需要但未提供的材料

• 精確、可調節的微量移液器，含一次性吸液頭（5-1000 μL容積）
• 去離子水
• 標板清洗系統
• 酶標儀，含450nm濾波器
• 計時(shí)器
• 刻度量筒
• 燒瓶
• 試管或微滴定板，用于稀釋血清

注意事項

用于體外診斷

• 在制備質(zhì)控品的過(guò)程中使用的所有人源性材料已經(jīng)過(guò)人類(lèi)免疫缺陷病毒1/2（HIV 1 /2）抗體、丙肝（HCV）和乙肝表面抗原的檢測，結果為陰性。但是，任何測試方法都不能*確信，且所有人源性質(zhì)控品和抗原包被微孔板都應按照潛在傳染性材料處理。疾病控制和預防中心以及美國國立衛生研究院建議將潛在傳染原按照生物安全二級²處理。
• 該測試只能使用血清執行。尚未建立使用全血、血漿或其它標本基質(zhì)的方法。
• 不可使用黃疸或脂血癥血清，以及出現溶血或微生物生長(cháng)的血清。
• 不可加熱，否則血清將失去活性。
• 在開(kāi)始檢測前所有試劑必須平衡至室溫（20-25℃）。檢測受溫度變化的影響。微孔板在達到室溫（20-25℃）之前不可從密封袋中取出。
• 直接用干凈的吸液頭從試劑瓶中吸出試劑。轉移試劑可能導致污染。
• 未使用的微孔應該立即重新密封并儲存于干燥環(huán)境中。否則將產(chǎn)生錯誤結果。
• 底物系統：
  • 由于TMB易受金屬離子的污染，所以底物系統不能與金屬表面接觸。
  • 避免長(cháng)時(shí)間陽(yáng)光直射。
  • 有些清潔劑可干擾TMB的性能。

TMB可能呈現淡藍色，這不影響底物的活性或測定結果。

登革熱病毒間接法IgG抗體檢測試劑盒